PCR教學試劑盒
Cat. #：P8021，P8022
產品簡介
本(ben)試(shi)劑(ji)盒是按照(zhao)教(jiao)學實(shi)驗內容設計的，符合標準擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)流程的，教(jiao)學用PCR反(fan)應試(shi)劑(ji)盒。本(ben)試(shi)劑(ji)盒所(suo)提供的模(mo)板(ban)為(wei)插(cha)入(ru)特定大(da)小DNA片段的PBluescipt SK（+）重組質粒；引物(wu)為(wei)根據所(suo)插(cha)入(ru)DNA序(xu)列和(he)擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)片段大(da)小不同(tong)設計的上下游引物(wu)。PCR結果可(ke)獲得特定大(da)小（500 bp或1,000 bp）的PCR產物(wu)。
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產品組成
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Component |
P8021 （500 bp，30次） |
P8022 （1,000 bp，30次） |
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DNA模板 |
150 μl，500 bp |
150 μl，1,000 bp |
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上游引物?(10 μM) |
75 μl |
75 μl |
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下游引物(10 μM) |
75 μl |
75 μl |
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dNTP混合物(2.5 mM) |
150 μl |
150 μl |
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Taq DNA聚合(he)酶(mei)(2.5 U/μl) |
40 μl |
40 μl |
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10×PCR緩沖液 |
500 μl |
500 μl |
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超純水 |
1 ml |
1 ml |
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說明書 |
1份 |
1份 |
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活性定義
一個活性(xing)單(dan)位（U）指用活性(xing)化的(de)大馬哈魚精子DNA作為(wei)模板(ban)/引(yin)物(wu)，在72℃、30 min內，攝入10 nmol全核苷酸所需(xu)的(de)酶量。
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保存條件
10×PCR緩沖液保(bao)存于4℃，其他成分-20℃保(bao)存。
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質量控制
純度檢測：經質(zhi)量檢測，產品不(bu)含脫氧(yang)核糖核酸(suan)內切(qie)酶、脫氧(yang)核糖核酸(suan)外切(qie)酶和核糖核酸(suan)酶污染(ran)。
功能檢(jian)測：PCR方(fang)法檢(jian)測本試劑盒無(wu)宿主(zhu)殘余DNA，也無(wu)其他DNA污染(ran)，能有效完成PCR擴增(zeng)。
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應用舉例
1.?配制反應體系
請于冰上配置反應體系，體系大小與組分用量與添加順序可調整：
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Ordinal |
Component |
Volume (25 μl reaction volume) |
Volume (50 μl reaction volume) |
Volume (50 μl reaction volume，n管) |
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1 |
10×PCR緩沖液（Mg2+?Plus） |
2.5 μl |
5 μl |
5×(n+1) μl |
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2 |
dNTPs（2.5mM） |
2 μl |
4 μl |
4×(n+1) μl |
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3 |
上(shang)游引物?? (10 μM) |
1 μl |
2 μl |
2×(n+1) μl或a μl×(n+1) |
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4 |
下游(you)引物?? (10 μM) |
1 μl |
2 μl |
2×(n+1) μl或a μl×(n+1) |
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5 |
Taq ? DNA聚合酶（2.5U/μl） |
0.5 μl |
1 μl |
1×(n+1) μl或(huo)a μl×(n+1) |
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6 |
template ? DNA |
2 μl |
4 μl |
4×(n+1) μl或a μl×(n+1) |
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7 |
超純水 |
16 μl |
32 μl |
32×(n+1) μl |
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8 |
石蠟油 |
如(ru)不能設置(zhi)頂蓋溫度，需(xu)適量(liang)加入石(shi)蠟(la)油。 |
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●?加入(ru)各組分后，請用槍頭反復吸吹幾(ji)次，充分混勻。
●?在一次配(pei)制多管需(xu)分裝時(shi)建議按(an)（n+1）的反應液量配(pei)制，以確保分配(pei)時(shi)的耗損(sun)不會影響實驗，同時(shi)選擇大于總體積的離(li)心管便于混勻(yun)。
●?如需(xu)使(shi)用其他體(ti)積的PCR反(fan)應(ying)體(ti)系，請按各(ge)組分比例縮減或增(zeng)加各(ge)組分用量。
●?組(zu)分(fen)中(zhong)引(yin)物(wu)、DNA模板(ban)、Taq DNA聚(ju)合酶常(chang)用于梯度(du)實驗，如有調(diao)(diao)整(zheng)，請注意調(diao)(diao)超(chao)純水(shui)的(de)用量至相(xiang)應的(de)體系(xi)。
●?將(jiang)混勻(yun)的各管短(duan)暫離心(xin)，置于PCR儀中。
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2.?設定反應程序進行PCR反應
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Stage ? |
Temperature |
Time |
Number ? of Cycles |
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Initial ? Denaturation |
94℃ |
3 ? min |
1 |
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Denaturation |
94℃ |
30 ? sec |
30 |
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Annealing |
55℃ |
30 ? sec |
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Extension |
72℃ |
30 ? sec or 45 sec |
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Final ? Extension |
72℃ |
5 ? min |
1 |
●?設定PCR程序時，請根(gen)據目的(de)片段大小決定延(yan)(yan)(yan)伸時間(jian)，如果目的(de)片段大小為(wei)500 bp時，延(yan)(yan)(yan)伸時間(jian)為(wei)30 sec，目的(de)片段為(wei)1 kb時，延(yan)(yan)(yan)伸時間(jian)為(wei)45 sec。
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3.?分析結果
反(fan)(fan)應結束后(hou)取2-5?μl反(fan)(fan)應產物(wu)與loading buffer混勻(yun)后(hou)進行瓊脂糖(tang)凝膠電泳，通過凝膠成(cheng)像設備(bei)觀察目的條帶的擴增情況。
●?500 bp產物(wu)建議電(dian)泳條件為(wei)1.7%瓊脂(zhi)糖凝膠(jiao)，0.5×TBE，7 V/cm，20-40 min，建議Marker為(wei)?DSTM 2000（M1101）。
●?1 kb產(chan)物建議(yi)電(dian)泳條件為(wei)1.0%瓊(qiong)脂糖凝膠(jiao)，1×TAE，7 V/cm，20-40 min，建議(yi)Marker為(wei)?DSTM 5000（M1111）。
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注意事項
請嚴(yan)格按照說明書提(ti)供的實驗(yan)(yan)體系(xi)及實驗(yan)(yan)條件進行試驗(yan)(yan)。
室(shi)溫下Taq DNA聚合酶(mei)有一定的活(huo)性(xing)，為避免發生非特異性(xing)擴增(zeng)，請于冰上(shang)配置反(fan)應體系，并且最后添加Taq DNA聚合酶(mei)或模(mo)板DNA。
挑(tiao)取菌(jun)落時，應選擇單(dan)菌(jun)落，不要挑(tiao)取太多菌(jun)體，以免影響PCR結(jie)果。