RNase A

BR級(ji)，僅供(gong)研究使用

貨號：N9047

規格：1g

比活性：≥3000U/mg蛋白（≥60Kunitz單位/mg蛋白）。

形式：含有1 g RNase A，凍干粉末

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產品說明

RNase A是(shi)一種(zhong)內(nei)切核(he)(he)糖核(he)(he)酸(suan)(suan)(suan)酶(mei)，分子量為13.7 kDa（單(dan)體(ti)），可在C和U殘基位置(zhi)特(te)異性(xing)降解單(dan)鏈(lian)RNA。該(gai)酶(mei)可以(yi)切割(ge)核(he)(he)苷酸(suan)(suan)(suan)5’-核(he)(he)糖與鄰近嘧啶核(he)(he)苷3’-核(he)(he)糖上磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)基團之間的(de)磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)二酯鍵(jian)，產生(sheng)的(de)2’, 3’-環磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)可以(yi)水(shui)解成相應(ying)的(de)3’-核(he)(he)苷磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)鹽。

RNase A推薦工作濃(nong)(nong)度(du)(du)1-100?μg/ml，因應用類型(xing)的不同而異(yi)。該酶在多(duo)種反應條件(jian)下均有活性。低(di)鹽離子(zi)濃(nong)(nong)度(du)(du)時(shi)（0-100 mM NaCl），RNase A可以切(qie)割單鏈(lian)RNA、雙鏈(lian)RNA、以及RNA/DNA雜(za)合子(zi)中(zhong)的RNA；然而，當(dang)NaCl濃(nong)(nong)度(du)(du)大于300 mM時(shi)，RNase A則特異(yi)性切(qie)割單鏈(lian)RNA。

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應用

——質粒(li)和(he)基因(yin)組DNA的(de)制備

——從重組(zu)蛋白(bai)制劑中(zhong)去除RNA

——核糖核酸酶保護試(shi)驗

——定位DNA或(huo)RNA中(zhong)的(de)單(dan)堿基突(tu)變

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保存條件

4℃保(bao)存。在密封(feng)和干燥條件下儲存的保(bao)質期為三(san)年。RNase A粉末(mo)可在室溫(wen)下運(yun)輸(shu)。

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質量控制

功能檢(jian)測方法為質粒DNA提取過程中(zhong)的RNA降解。

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活性單位的定義

當(dang)酵母RNA在37°C和pH 5.0下被水解時，一個單位的酶在260 nm處導致吸(xi)光(guang)度增(zeng)加1.0。

50U大(da)約相當于(yu)1個(ge)Kunitz單(dan)位。

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抑制和失活
-抑制劑：最有效的抑制劑是來自哺乳動物細胞細胞質中的~50 kDa蛋白，如核boLock?RNase抑制劑。
-其他抑制劑：尿苷(gan)2’,3’-環(huan)釩酸(suan)鹽(yan)、5’-二磷(lin)酸(suan)腺(xian)苷(gan)3’-磷(lin)酸(suan)鹽(yan)和5’-二磷(lin)酸(suan)腺(xian)苷(gan)2’-磷(lin)酸(suan)鹽(yan)(2)、SDS、焦碳(tan)酸(suan)二乙(yi)酯、4M胸(xiong)氰酸(suan)胍加0.1M?2-巰基乙(yi)醇和重金屬離子。

-用苯酚(fen)/氯仿萃取(qu)法滅活。

-在95°C下加(jia)熱10分鐘后(hou)滅活(huo)。

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本品僅供科學研究使用。

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