PCR（聚(ju)合酶鏈式(shi)反應）幾乎是分(fen)子實驗室里最常見(jian)的技術之一(yi)。但有時候(hou)，做著做著，條(tiao)帶就是不上鏡：要(yao)(yao)么(me)無條(tiao)帶，要(yao)(yao)么(me)全是拖尾，要(yao)(yao)么(me)陰性對照還神奇(qi)地亮了……??
別急(ji)！今(jin)天我們就來盤點 PCR失敗的5個常見原因(yin)，并提供實用的解決辦(ban)法，幫(bang)你少踩坑。
1???模板DNA質量或濃(nong)度不合適(shi)
?? 表現(xian)：無條帶(dai)、條帶(dai)過弱或(huo)拖尾(wei)。
????? 原因：DNA降解、雜質殘留，或者濃(nong)度(du)過(guo)低(di)/過(guo)高。
? 解決辦法：
- 保證DNA純度（A260/A280 = 1.8–2.0）；
- 稀釋過濃模板；
- 植物/土壤等樣本建議用高純度提取試劑盒。
2???引物設計或濃度有問題
???表現：非特異性條帶、引物二聚體。
???原因：引物設計不合理，濃度過高/過低。
??解決辦法：
-
長度18–25 bp，GC含量40–60%；
-
避免3’端互補；
-
終濃度(du)一般(ban)0.1–0.5 μM，必要時做梯度(du)PCR優(you)化。
3???PCR體系或酶活性問題
???表現：完全無擴增或擴增效率低。
???原因：Taq酶失活、Mg2?濃度不合適、dNTP降解。
??解決辦法：
-
分裝保(bao)存酶(mei)，避(bi)免反(fan)復(fu)凍融(rong)；
-
優(you)化Mg2?濃度（1.5–2.5 mM）；
-
用新鮮dNTP；
-
推薦選擇性能優異的PCR預混液??? 預(yu)混液中已(yi)優(you)化(hua)了緩沖體(ti)系(xi)和酶(mei)活性，能顯著提升擴(kuo)增成功率，減(jian)少(shao)反復調試的時間(jian)，非常適合常規科研實驗(yan)。
4???實驗操作污染
???表現：陰性對照也出現(xian)條帶。
???原因：PCR產物殘留、移液槍污染、空氣中DNA污染。
??解決辦法：
-
嚴格(ge)分區操作（提取區/體系配置區/產(chan)物(wu)分析區分開）；
-
用帶濾芯的槍頭；
-
定期清潔實驗臺，使用核酸(suan)去除劑(ji)。
5???循環條件設置不當
???表現：條帶模糊、非特異性擴增或無結果。
???原因：退火溫度過低/過高、延伸時間不足、循環數過多。
??解決辦法：
-
根據引物(wu)Tm值設置(zhi)退(tui)火(huo)溫(wen)度；
-
延(yan)伸時間約 1 kb/min；
-
循(xun)環數控(kong)制在30–35次(ci)。
???總結
PCR失敗并不可怕，常見問題主要集中在?模板、引物、體系、操作和循環條件?這五個方面。逐一排查，總能找到(dao)原因。
而對于高校實驗室或科研人員來說，選擇一款高性能PCR預混液，往往能讓PCR事半功倍，節(jie)省大量(liang)試錯時間。
?? 科研路(lu)上(shang)，少一點彎(wan)路(lu)，多(duo)一點高(gao)效！
| 貨號 | 產品名稱 | 適用場景 |
| P2141 | Super TaqMix | 常規PCR擴增 |
| P2111 | Super HIFI PCR Master Mix | 長片段高保真擴增 |
| P2121 |
|
|
| P2091 | SYBR Green qPCR Mix | 染料法高特異性基因定量分析 |
| P2701 | Multiplex Probe qPCR Mix Plus U | 探針法多基因同時定量檢測 |
| R1081 | PowerScript RT SuperMix | 全預混高效RNA逆轉錄 |
| RP1001B | 2X One Step RT-PCR Mix | 快速逆轉錄與PCR擴增一體化 |
| V5007 | 2X One Step Prime RT-qPCR Mix | 快速靈敏的轉錄組基因定量檢測 |
| P9013 |
|
|
|
|
|
|
| R1021 | TRAzol | 高效提取高質量RNA |
?
?訂購咨詢?
廣州東盛生物科技有限公司
?? sales@gdsbio.com
?? 020-87791356
???www.mujiartfamily.com